桃作为五果之首，在果业发展中的地位一直处于稳中有升的势态。然而，近年来的极端气候导致桃树的冷害和冻害发生频率及程度都在不断增加。《桃CBF和ICE转录因子基因克隆与功能分析》(作者:宋艳波)以生产中不同桃品种为试材，从中分离出植物对低温逆境响应的主要信号转导路径中的两个关键转录因子基因CBF和ICE，并对它们进行相应的信息与功能分析研究，希望为桃抗寒机理及抗寒能力改良的研究提供分子层面的信息与基础。
第一章 文献综述
第一节 植物抗逆性及研究意义
一、逆境与植物抗逆性
二、研究植物抗逆性的意义
第二节 低温胁迫对植物的影响及研究意义
一、低温胁迫
二、低温胁迫对植物生长发育的影响
第三节 植物的抗寒机理及研究进展
一、冷驯化(cold acclimation)
二、膜结构的稳定与抗寒性
三、渗透调节物质
四、植物的抗氧化保护系统
五、细胞酶系
六、冷诱导基因(COR)
第四节 植物抗寒基因与抗寒性改良的研究
一、编码功能性蛋白的基因
二、编码调控性蛋白的基因
三、CBF和ICE转录因子基因对植物抗寒性的改良
第五节 桃的冷害和抗冷性研究
一、桃概述
二、低温对桃树生长发育的影响
第六节 本研究的目的和意义
第二章 桃CBF和ICE转录因子基因的克隆和序列分析
第一节 引言
第二节 试验材料、试剂和仪器
一、试验材料
二、试验所需的菌株、载体和感受态细胞
三、主要化学试剂
四、主要仪器设备
第三节 试验方法
一、桃基因组DNA和总RNA的提取与检测
二、PCR扩增及其产物的检测
三、目的片段的回收与检测
四、克隆片段的连接和转化及测序
五、CBF基因的酵母单杂交
第四节 结果与分析
一、桃基因组DNA和总RNA的检测结果
二、桃CBF基因和ICE基因的克隆
三、桃树CBF基因的生物信息学分析
四、桃ICE基因的信息学分析
五、酵母单杂交
第五节 小结与讨论
一、桃的核酸提取
二、CBF和ICE基因的克隆
三、cBF基因的序列分析
四、ICE基因的序列分析
五、酵母单杂交
第三章 桃CBF和ICE基因的烟草转化
第一节 引言
第二节 试验材料与仪器
一、试验材料
二、主要化学试剂
三、主要仪器设备
第三节 试验方法
一、P3301．PpCBF和UN.ICE表达载体构建
二、农杆菌工程菌的获得与鉴定
三、表达载体对烟草的转化
第四节 结果与分析
一、表达载体的构建
二、过表达转桃CBF基因、ICE基因烟草的创制
第五节 小结
一、外源基因转入不同物种所需载体不同，不同基因转入同一物种也存在过表达载体的选择问题
二、转基因过程中的污染问题
第四章 转桃CBF基因烟草耐逆性分析
第一节 引言
第二节 试验材料和仪器
一、试验材料
二、主要化学试剂
三、主要仪器设备
第三节 试验方法
一、转CBF基因烟草的分子鉴定
二、转CBF基因烟草苗期抗逆性研究
三、转CBF基因烟草苗期与抗性相关的生理生化指标的检测
第四节 结果与分析
一、过表达CBF转基因烟草的分子鉴定结果
二、转CBF基因烟草阳性植株的逆境胁迫结果
第五节 小结与讨论
一、转CBF、基因烟草的分子鉴定
二、转桃CBF基因与非转基因烟草植株在逆境胁迫下的表型变化
三、转桃CBF基因比非转基因烟草植株矮小
四、转桃CBF基因与对照株在逆境胁迫下的丙二醛和电导度变化
五、转桃CBF基因与非转基因烟草植株在逆境胁迫下的SOD酶和POD酶活性变化
六、转桃CBF、基因与非转基因烟草植株在逆境胁迫下的可溶性糖和脯氨酸含量的变化
第五章 转CBF基因烟草的：FAD和ERDB两基因的表达分析
第一节 引言
第二节 试验材料和仪器
一、试验材料
二、主要化学试剂和仪器
第三节 试验方法
一、不同处理下烟草叶片的总RNA提取
二、RNA的质量检测与RT—PCR
三、FAD和ERDB两基因在逆境下的应答表达分析
第四节 结果与分析
一、低温胁迫下转CBF基因烟草与非转基因烟草的FAD和ERDB基因的表达
二、干旱胁迫下转CBF基因烟草与非转基因烟草的FAD和ERDB基因的表达
三、盐胁迫下转CBF基因烟草与非转基因烟草的FAD和ERDB基因的表达
第五节 小结与讨论
第六章 研究结果与展望
参考文献
附 录
附录一 本实验所需培养基的配方
附录二 试验中所用的引物及序列
附录三 pCMBLA3301．CBF表达载体的构建图谱
附录四 UN．ICE表达载体的构建图谱
附录五 转基因烟草转化过程
附录六 冷胁迫下转CBF基因植株与非转基因植株的表型变化
附录七 干旱胁迫下转CBF基因植株与非转基因植株的表型变化
缩略词表
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