全书共包含八章内容,分别为绪论、脂肪酸、TALB超家族调控脂肪酸的分子基础、GhBLH1调控亚麻酸生物合成促进棉纤维伸长的分子机制研究、GhBLH1靶向调控GhFAD7A-1转录促进棉纤维伸长的分子机制研究、GhKNOX6通过抑制GhFAD7A-1的转录活性负调控纤维伸长的分子机制研究、GhKNOX6抑制GhBLH1介导的纤维细胞伸长的分子机制研究和脂肪酸调控植物生长的农业应用前景。
本书兼具理论深度与实践价值,既为植物发育生物学研究者提供BLH-KNOX调控网络的最新范式,也可作为农学领域研究生掌握基因编辑、代谢组学等核心技术的实训指南。
第一章绪论001
1.1脂肪酸代谢与细胞器发育的耦合机制001
1.2脂肪酸与植物激素信号网络的互作机制002
1.2.1脂肪酸在乙烯信号通路中扮演关键角色002
1.2.2脂肪酸调控生长素运输与膜脂微环境002
1.2.3油菜素内酯与脂肪酸的协同效应003
1.3脂肪酸在特殊细胞类型生长中的特异性作用003
1.3.1棉花纤维:单细胞伸长的典范模型004
1.3.2胚胎发育与种子形成:生命起始的脂质准备004
参考文献005
第二章脂肪酸008
2.1饱和脂肪酸008
2.1.1饱和脂肪酸的结构特征008
2.1.2饱和脂肪酸的生物合成途径009
2.1.3饱和脂肪酸的降解机制010
2.1.4饱和长链脂肪酸的功能010
2.2不饱和脂肪酸011
2.2.1不饱和脂肪酸的结构011
2.2.2不饱和脂肪酸的合成012
2.2.3不饱和脂肪酸的降解012
2.2.4不饱和脂肪酸代谢及其调控013
参考文献014
第三章TALE超家族调控脂肪酸的分子基础017
3.1转录因子调控植物生长发育017
3.2TALE超家族转录因子研究进展019
3.2.1BLH转录因子019
3.2.2KNOX转录因子022
参考文献025
第四章GhBLH1调控亚麻酸生物合成促进棉纤维伸长的分子机制研究032
4.1材料与方法032
4.1.1植物材料032
4.1.2植物转化033
4.1.3植物DNA的提取033
4.1.4棉花纤维RNA提取及检测034
4.1.5cDNA合成034
4.1.6实时定量PCR(qRT-PCR)035
4.1.7纤维长度测量036
4.1.8RNA-Seq分析036
4.1.9不饱和脂肪酸含量测定036
4.2结果与分析037
4.2.1GhBLH1转基因棉花鉴定与分析037
4.2.2GhBLH1转基因棉花表型分析038
4.2.3GhBLH1转基因棉花转录组数据分析039
4.2.4转录组数据差异基因KEGG富集分析040
4.2.5长链不饱和脂肪酸在纤维中含量分析044
4.2.6长链不饱和脂肪酸代谢途径差异基因表达分析044
4.3讨论048
4.3.1GhBLH1促进棉花纤维发育048
4.3.2GhBLH1参与亚麻酸(C18:3)的合成调控048
参考文献049
第五章GhBLH1靶向调控GhFAD7A-1转录促进棉纤维伸长的分子机制研究051
5.1材料与方法051
5.1.1植物材料051
5.1.2植物转化052
5.1.3棉花纤维RNA提取及检测052
5.1.4cDNA合成052
5.1.5实时定量PCR(qRT-PCR)052
5.1.6纤维长度测量052
5.1.7酵母单杂试验052
5.1.8烟草瞬时表达和双荧光素酶(dual-LUC)测定055
5.1.9原核表达试验(His标签)057
5.1.10凝胶阻滞电泳迁移试验(EMSA)062
5.1.11染色质免疫共沉淀试验063
5.2结果与分析066
5.2.1GhFAD7A-1是GhBLH1的直接靶基因066
5.2.2GhBLH1的POX结构域直接结合GhFAD7A-1启动子067
5.2.3GhBLH1直接结合GhFAD7A-1启动子的P2段068
5.2.4GhBLH1的POX结构域直接结合GhFAD7A-1启动子的P2段TGGA顺式元件070
5.2.5GhFAD7A-1转基因棉花鉴定与分析071
5.2.6GhFAD7A-1转基因棉花表型分析072
5.3讨论075
参考文献076
第六章GhKNOX6通过抑制GhFAD7A-1的转录活性负调控纤维伸长的分子机制研究078
6.1材料与方法078
6.1.1植物材料0786.1.2植物转化078
6.1.3棉花纤维RNA提取及检测079
6.1.4cDNA合成079
6.1.5实时定量PCR(qRT-PCR)079
6.1.6纤维长度测量079
6.1.7酵母双杂试验079
6.1.8系统发育进化分析081
6.1.9蛋白结构域分析082
6.1.10原核表达试验(GST标签)082
6.1.11Pull-down试验083
6.1.12免疫共沉淀试验(Co-IP)084
6.2结果与分析086
6.2.1棉花中KNAT家族进化分析086
6.2.2GhBLH1蛋白与GhKNOX6蛋白相互作用088
6.2.3GhKNOX6蛋白结构域分析090
6.2.4GhBLH1蛋白的POX结构域结合GhKNOX6蛋白K2结构域发挥功能091
6.2.5GhKNOX6转基因棉花鉴定与分析092
6.2.6GhKNOX6转基因棉花表型分析092
6.2.7GhKNOX6抑制GhFAD7A-1的转录活性097
6.3讨论099
6.3.1GhKNOX6调控棉花纤维伸长099
6.3.2GhBLH1与GhKNOX6结合调控下游基因表达099
参考文献100
第七章GhKNOX6抑制GhBLH1介导的纤维细胞伸长的分子机制研究102
7.1材料与方法102
7.1.1植物材料102
7.1.2植物转化102
7.1.3棉花纤维RNA提取及检测102
7.1.4cDNA合成103
7.1.5实时定量PCR(qRT-PCR)103
7.1.6纤维长度测量103
7.1.7酵母单杂试验103
7.1.8烟草瞬时表达和双荧光素酶(dual-LUC)测定103
7.1.9凝胶阻滞电泳迁移试验(EMSA)103
7.1.10棉花杂交试验103
7.2结果与分析104
7.2.1GhKNOX6结合GhBLH1抑制GhFAD7A-1的转录活性104
7.2.2GhKNOX6抑制GhBLH1介导的纤维细胞伸长104
7.3讨论112
7.3.1BLHs与KNOX蛋白相互作用调控植物发育112
7.3.2脂肪酸参与植物细胞的伸长112
参考文献113
第八章脂肪酸调控植物生长的农业应用前景115
8.1油料作物与高能饲草的遗传改良115
8.2纤维作物产量与品质的提升116
8.3抗逆性作物的分子设计116
8.4合成生物学与高值化合物生产117
8.5技术瓶颈与未来发展方向117
参考文献118
附录119
附录Ⅰ用于定量qRT-PCR分析基因表达的引物119
附录Ⅱ本研究的载体构建使用引物120