本书分为五篇,第一篇为生物化学与分子生物学实验室基础知识与基本技术,第二篇为生物化学实验,第三篇为分子生物学实验,第四篇为创新设计实验,第五篇为虚拟仿真实验项目,共精选了39个生物化学与分子生物学的具体实验。本书在内容设置方面,不仅保留了经典实验的精髓,还融入了教师科研项目中的综合性实验,以激发学生的探索精神和创新思维。此外,还引入了部分虚拟仿真实验项目,将传统实验室操作与现代信息技术相结合,学生将能够获得更加全面和立体的学习体验。
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南昌大学 生物学 本科
江苏省中科院植物所 硕士
中国药科大学 微生物与生化药学 博士
目录
第一篇 实验室基础知识与基本技术
第一章 实验室基本常识 1
第二章 实验基本技术2
第一节 分光光度法 2
第二节 离心技术 3
第三节 层析技术 5
第四节 电泳技术 9
第五节 PCR技术 13
第六节 印迹技术 16
第七节 免疫共沉淀技术 19
第八节 干扰技术 21
第九节 图像分析技术 23
第二篇 生物化学实验
实验一 蛋白质定量测定 25
实验二 血清蛋白乙酸纤维素薄膜电泳 32
实验三 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)法测定蛋白质分子量 34
实验四 丙二酸对琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制 38
实验五 影响酶活性的因素 40
实验六 碱性磷酸酶米氏常数(Km)测定及影响因素 43
实验七 血清乳酸脱氢酶同工酶分析 46
实验八 凝胶层析法分离血红蛋白和DNP-酪蛋白 48
实验九 血清葡萄糖含量的测定 50
实验十 肝糖原的提取、鉴定与定量 55
实验十一 血清甘油三酯的测定 58
实验十二 血清高密度脂蛋白-胆固醇含量的测定 62
实验十三 酮体代谢的定性观察 64
实验十四 转氨基作用 68
实验十五 血清转氨酶活性测定 70
实验十六 直接碘量法测定不同原材料中的维生素C含量 74
实验十七 荧光分光光度法测定血清中维生素E含量 76
实验十八 改良J-G法测定血清中总胆红素和结合胆红素含量 78
第三篇 分子生物学实验
实验一 动物组织细胞基因组DNA提取与鉴定 81
实验二 β-actin基因PCR扩增与产物鉴定 86
实验三 动物组织细胞总RNA的提取和鉴定 88
实验四 小鼠β-actin基因mRNA水平检测 91
实验五 检测小鼠不同脏器鞘磷脂合酶2 的mRNA 表达水平及鞘磷脂合酶的活性 94
实验六 肉制品DNA条形码鉴定技术 98
实验七 检测人CLEC4M基因多态性 102
实验八 PCR-RFLP检测NQO1 C609T多态性 105
实验九 感受态细胞的制备及蓝白斑筛选 108
实验十 重组质粒的构建与转化 112
实验十一 质粒DNA的提取与酶切鉴定 116
实验十二 人p16基因PCR扩增产物的TA克隆 120
第四篇 创新设计实验
实验一 lentiCRISPR-v2 UFL1重组质粒构建与PCR验证 123
实验二 绿色荧光蛋白诱导表达、亲和分离及免疫印迹检测 129
第五篇 虚拟仿真实验项目
实验一 生物大分子分离纯化综合设计虚拟仿真实验 134
实验二 虚拟P2实验室分离培养和鉴定O157︰H7血清型出血性大肠杆菌 137
实验三 定量蛋白质组学研究虚拟仿真实验 140
实验四 蛋白质表达纯化及其结构解析虚拟仿真实验 143
实验五 地中海贫血基因的分子诊断虚拟仿真项目 146
实验六 蛋白酶表达纯化与活性测定虚拟仿真实验 149
实验七 G蛋白偶联受体FPR1全基因克隆、真核表达及功能测定虚拟仿真实验 152